Вакцина против сибирской язвы для животных инструкция

ИНСТРУКЦИЯ по применению вакцины против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живой жидкой

Транскрипт

1 ИНСТРУКЦИЯ по применению вакцины против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живой жидкой (Организация-разработчик: ФКП «Орловская биофабрика», , Орловская область, Орловский район, поселок Биофабрика) I. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ 1. Торговое наименование лекарственного препарата: Вакцина против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живая жидкая. Международное непатентованное, или группировочное, или химическое наименование лекарственного препарата: Вакцина против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живая жидкая. 2. Лекарственная форма: суспензия для инъекций. Вакцина изготовлена из живых спор культуры производственного сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ ( млн в одной ампуле или флаконе) с добавлением в качестве стабилизатора 30 %-ного нейтрального раствора глицерина. 3. По внешнему виду вакцина представляет собой прозрачную или слегка опалесцирующую жидкость с незначительным беловатым осадком, образующимся при хранении, легко разбивающимся в гомогенную взвесь. Срок годности вакцины два года от даты выпуска при соблюдении условий хранения и транспортирования и не более шести часов после первого вскрытия ампул (флаконов). По истечении срока годности вакцина к применению не пригодна. 4. Вакцина расфасована по 1,0 см 3 (10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 доз для лошадей, КРС, оленей, верблюдов, ослов, свиней, пушных зверей; 20, 40, 60, 80, 100, 120, 140, 160, 180, 200 доз для овец и коз для подкожного применения или 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 доз для лошадей, КРС, оленей, верблюдов, ослов, свиней; 20, 40, 60, 80, 100, 120, 140, 160, 180, 200 доз для пушных зверей и овец для внутрикожного применения) в стеклянные запаянные ампулы вместимостью 3 см 3 или стеклянные флаконы вместимостью 4 см, 5 см или 10 см, укупоренные резиновыми пробками, укреплёнными алюминиевыми колпачками; по 10 см 3 (10 доз для лошадей, КРС, оленей, верблюдов, ослов, свиней, пушных зверей; 20 доз для овец и коз для подкожного применения), 20 см 3 (20 доз для лошадей, КРС, оленей,

2 2 верблюдов, ослов, свиней, пушных зверей; 40 доз для овец и коз для подкожного применения), 50 см 3 (50 доз для лошадей, КРС, оленей, верблюдов, ослов, свиней, пушных зверей; 100 доз для овец и коз для подкожного применения), 100 см 3 (100 доз для лошадей, КРС, оленей, верблюдов, ослов, свиней, пушных зверей; 200 доз для овец и коз для подкожного применения) в стеклянные флаконы соответствующей вместимости, укупоренные резиновыми пробками, укреплёнными алюминиевыми колпачками. Ампулы с вакциной упакованы в картонные коробки по 10 шт., обеспечивающие их целостность. В каждую коробку вложена инструкция по применению вакцины. Флаконы с вакциной в расфасовке по 1,0 см 3, 10 см 3 и 20 см 3 упакованы в картонные коробки по 10, 20 или 50 шт., обеспечивающие их целостность. В каждую коробку вложена инструкция по применению вакцины. Флаконы с вакциной в расфасовке по 50 и 100 см 3 упакованы в ящики из гофрированного картона или других материалов, которые являются транспортной тарой. В каждый ящик вложены не менее пяти экземпляров инструкции по применению вакцины. 5. Вакцину хранят и транспортируют в сухом тёмном месте при температуре от 2 С до 8 С. Допускается транспортирование вакцины при температуре не выше 20 С в течение 14 суток. 6. Вакцину следует хранить в местах, недоступных для детей. 7. Вакцину в ампулах (флаконах) без маркировки, с нарушением целостности и/или герметичности укупорки, с изменённым внешним видом, подвергшуюся замораживанию, с истекшим сроком годности, а также остатки вакцины, неиспользованной после вскрытия ампул (флаконов), бракуют, обеззараживают кипячением в течение двух часов и утилизируют. Утилизация обеззараженной вакцины не требует соблюдения специальных мер предосторожности. 8. Вакцину отпускают без рецепта. II. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА 9. Вакцина относится к группе иммунобиологических лекарственных препаратов. 10. Вакцина обеспечивает формирование у животных иммунитета к возбудителю сибирской язвы через 10 суток после однократного введения продолжительностью 12 месяцев у взрослых животных и шесть месяцев у молодняка. Одна иммунизирующая доза вакцины для подкожного и внутрикожного применения для лошадей, КРС, оленей, верблюдов, ослов, свиней, пушных зверей составляет 22,0 млн, для овец 11,0 млн живых сибиреязвенных спор. Одна иммунизирующая доза для подкожного введения козам составляет 11,0 млн живых сибиреязвенных спор. Одна коммерческая доза составляет 22,0 млн живых сибиреязвенных спор в 1 см 3 вакцины. Вакцина безвредна, умеренно реактогенна, лечебными свойствами не обладает.

3 3 III. ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ 11. Вакцина предназначена для профилактики сибирской язвы у сельскохозяйственных животных (крупный и мелкий рогатый скот, лошади, ослы, верблюды, олени, свиньи, пушные звери) во всех категориях хозяйств. 12. Запрещено вакцинировать животных: — больных инфекционными болезнями; — клинически больных; — ослабленных и истощенных; — в течение 10 суток после хирургических операций; — с повышенной температурой тела. На животных, не подлежащих иммунизации, составляют опись с указанием причины, из-за которой они не были вакцинированы, и возможного срока проведения иммунизации. 13. Вакцину вводят животным подкожно, используя одноразовые или обычные шприцы, или внутрикожно с помощью безыгольного инъектора в следующих дозах: Вид животных Место введения вакцины Дозы, см 3 Подкожно Овцы и козы Область задней трети шеи или внутренней поверхности бедра 0,5 Крупный рогатый скот, олени, Область задней трети шеи верблюды, лошади, ослы 1,0 Свиньи Область внутренней поверхности бедра или за ухом 1,0 Пушные звери Область внутренней поверхности бедра или подхвостовое зеркало 1,0 Внутрикожно Крупный рогатый скот, олени, Бесшерстный участок промежности верблюды 0,2 Лошади и ослы Область задней трети шеи 0,2 Свиньи За ухом 0,2 Овцы и пушные звери Подхвостовое зеркало 0,1 Вакцина во флаконах в расфасовке по 10, 20, 50 и 100 см 3 находится в готовом для применения виде и используется только для подкожного применения. Вакцину в ампулах и во флаконах в расфасовке по 1,0 см 3 перед применением разводят кипячёной водой или стерильным 0,9 % -ным раствором натрия хлорида или 30 %-ным раствором глицерина. С этой целью вакцину из ампулы (флакона) с помощью шприца с иглой переносят в стерильный флакон с соответствующим разбавителем, взятом, в зависимости от количества коммерческих доз в одной ампуле (флаконе), указанном на этикетке коробки с вакциной, в соответствии со следующей схемой:

4 4 Количество коммерческих доз в одной ампуле (флаконе), Способ указанное на этикетке коробки с вакциной применения Количество разбавителя, см 3 подкожно внутрикожно После соответствующего разведения вакцину используют для подкожного или внутрикожного применения. Запрещается подкожное применение вакцины, разведённой для внутрикожного применения. Для вакцинации используют шприцы, иглы, а также безыгольный инъектор, которые перед началом и после окончания работы стерилизуют кипячением в дистиллированной воде в течение двух часов. Запрещается использовать для стерилизации химические дезинфицирующие средства. В процессе иммунизации флакон с вакциной периодически встряхивают. При вакцинации соблюдают правила асептики и антисептики. Место введения вакцины дезинфицируют 70 %-ным раствором этилового спирта. В течение 10 суток после вакцинации за животными устанавливают наблюдение, не допускают перегревания, переохлаждения, утомительных перегонов. Молодняк всех видов животных, кроме жеребят, в первый раз вакцинируют в трехмесячном возрасте, повторно через шесть месяцев. Жеребят в первый раз вакцинируют в девятимесячном возрасте, повторно через шесть месяцев. Взрослых животных ревакцинируют ежегодно однократно. В случае заболевания сибирской язвой вакцинации подвергают всё поголовье, имевшее прямой или косвенный контакт с больным животным, независимо от времени года и сроков предыдущего введения вакцины. Внеплановой однократной вакцинации подвергают всех животных, впервые поступивших в хозяйство. В общее стадо вакцинированных животных допускают не ранее, чем через 14 суток после иммунизации. 14. Передозировка вакцины может вызвать у животных: — повышение температуры тела; — образование выраженного отёка в месте введения вакцины; — увеличение регионарных лимфатических узлов; — ухудшение общего состояния вплоть до летального исхода. Животных с указанными признаками немедленно изолируют и проводят лечение сывороткой противосибиреязвенной или глобулином противосибиреязвенным и/или антибиотиками (пенициллин, стрептомицин, тетрациклин, биомицин и др.), а также назначают им симптоматические средства (глюкозу, кофеин и камфорное масло или др.). 15. Особенностей поствакцинальной реакции при первичном и последующих введениях вакцины не установлено. 16. Запрещается иммунизация животных всех видов в последний месяц беременности и в течение 10 суток после родов.

5 5 17. Следует избегать нарушений схемы проведения вакцинации, поскольку это может привести к снижению эффективности иммунопрофилактики. В случае пропуска очередного введения вакцины необходимо провести иммунизацию как можно скорее. 18. В течение 10 суток после вакцинации у всех видов животных возможно повышение температуры тела и формирование в месте инъекции умеренно выраженной припухлости, исчезающей через 3 5 суток. У коз, наряду с повышением температуры тела, может наблюдаться формирование в месте инъекции отека, распространяющегося в область подгрудка, подчелюстного пространства и головы, увеличение регионарных лимфатических узлов и ухудшение общего состояния вплоть до летального исхода. При появлении выше указанных признаков осложнения животных немедленно изолируют и подвергают лечению, как указано в пункте Запрещается применение вакцины против сибирской язвы совместно с другими живыми иммунобиологическими препаратами, а также с антибиотиками, антигельминтиками и инсектоакарицидами в течение 14 суток до и после очередной иммунизации. 20. Молоко от вакцинированных животных используют без ограничений, за исключением случаев, когда у них проявляются поствакцинальные осложнения. В таком случае молоко подвергают кипячению и используют для кормления животным. Убой животных на мясо разрешается не ранее, чем через 10 суток после введения вакцины. При вынужденном убое животного в течение этого срока мясо направляют на термическую промышленную переработку, в случае гибели животного труп сжигают. IV. МЕРЫ ЛИЧНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ 21. При работе с вакциной следует соблюдать общие правила личной гигиены и техники безопасности, предусмотренные при работе с лекарственными средствами ветеринарного назначения. 22. Все лица, участвующие в проведении вакцинации должны быть одеты в спецодежду (резиновые сапоги, халат, брюки, головной убор, резиновые перчатки) и обеспечены очками закрытого типа. В местах работы должна быть аптечка доврачебной помощи. 23. При попадании вакцины на кожу и/или слизистые оболочки их рекомендуется немедленно промыть большим количеством водопроводной воды и обработать кожу 70 %-ным раствором этилового спирта, а слизистые оболочки раствором тетрациклина или хлортетрациклина ( мкг/мл). При отсутствии антибиотиков в глаза вводят несколько капель 1 %-ного раствора азотнокислого серебра, в нос 1 %-ный раствор протаргола. При случайном введении вакцины человеку необходимо место укола обработать 70 %-ным раствором этилового спирта и обратиться в медицинское учреждение.

6 6 В случае розлива вакцины, участок пола или почвы заливают 5 %-ным раствором хлорамина или горячим 10 %-ным раствором едкого натрия. Инструкция по применению вакцины против сибирской язвы животных из штамма 55- ВНИИВВиМ живой жидкой разработана ФКП «Орловская биофабрика», , Орловская область, Орловский район, поселок Биофабрика Наименование и адрес производственной площадки производителя лекарственного препарата для ветеринарного применения: Наименование, адрес организации, уполномоченной держателем или владельцем регистрационного удостоверения лекарственного препарата на принятие претензий от потребителя: ФКП «Орловская биофабрика» адрес: , Орловская область, Орловский район, поселок Биофабрика ФКП «Орловская биофабрика» адрес: , Орловская область, Орловский район, поселок Биофабрика С утверждением настоящей инструкции утрачивает силу «Инструкция по применению вакцины против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живой жидкой», утвержденная Россельхознадзором 14 июля 2016 г. Номер регистрационного удостоверения: ПВР-1-1.9/00178

1. Общие положения

1.1. Вакцина против сибирской язвы животных живая споровая лиофилизированная представляет собой взвесь живых спор бескапсульной авирулентной культуры штамма 55 в стабилизирующей среде и имеет вид белой пористой массы, хорошо растворяется в воде и физиологическом растворе, превращаясь в беловатую опалесцирующую жидкость.

1.2. Вакцину выпускают в ампулах с содержанием 100 — 200 доз для крупных животных. На ампуле указывается наименование биопрепарата, номер серии, срок годности и количество доз вакцины.

1.3. На коробке с ампулами должна быть этикетка с обозначением наименования вакцины, наименования предприятия-изготовителя, номеров серии и госконтроля, даты изготовления, количества ампул в коробке, количества доз в одной ампуле, разведения содержимого одной ампулы, условий хранения, ТУ. В каждую коробку вкладывают наставление по применению вакцины.

1.4. Вакцину хранят и перевозят всеми видами транспорта при температуре не выше 15 °С. Срок хранения сухой вакцины из штамма 55 при соблюдении условий хранения 2 года со дня изготовления.

1.5. При наличии отклонений от указанных требований вакцину бракуют и уничтожают путем автоклавирования (1 ч при 134 °С) либо кипячением в растворе соды (2 ч). Выбраковке и уничтожению подлежит как вся партия (серия) вакцины, так и отдельные ампулы или коробки с вакциной.

2. Порядок применения вакцины

2.1. Вакцину применяют для профилактических и вынужденных прививок животных, строго подкожно. Молодняку, не достигшему 3-месячного возраста, прививать вакцину не разрешается.

2.2. Овцам и козам вакцину вводят в области средней трети шеи или в бесшерстный участок внутренней поверхности бедра или грудной клетки в дозе 0,5 мл.

2.3. Лошадям, крупному рогатому скоту, оленям, верблюдам, ослам и пушным зверям всех возрастов вакцину вводят в области средней трети шеи в объеме 1 мл, а свиньям также в дозе 1 мл в области внутренней поверхности бедра или за ухом. Кожу на месте введения вакцины предварительно дезинфицируют 70-процентным спиртом или 3-процентным раствором фенола.

2.4. Для прививок следует пользоваться шприцем с хорошо пригнанным поршнем, не пропускающим вакцину в верхнюю часть цилиндра. Иглы должны быть тщательно пригнаны к шприцу. Рекомендовано использовать иглы не более 15 мм длиной. Шприцы и иглы перед началом прививок стерилизуют кипячением в течение 30 мин., а по окончании работы кипятят в 2-процентном растворе соды в течение 1 ч.

Другие публикации:  Можно ли заразить простудой

2.5. Для растворения вакцины следует применять стерильный физиологический раствор либо стерильную дистиллированную воду. Перед растворением вакцины шейку ампулы протирают спиртом, обжигают над пламенем горелки и обламывают. Затем стерильным шприцем с иглой в ампулу вливают 3 мл растворителя. Ампулу осторожно встряхивают до полного растворения вакцины и тем же шприцем вакцину переливают в стерильный флакон, содержащий требуемое количество растворителя. Если на стенках и на дне ампулы осталось значительное количество вакцины, необходимо тем же шприцем внести в ампулу 3 — 4 мл уже растворенной вакцины из флакона и, осторожно обмыв стенки ампулы, перенести во флакон.

После полного растворения сухой вакцины флакон тщательно встряхивают, предварительно закрыв его стерильной резиновой пробкой. Затем готовый препарат используют для вакцинации животных в течение суток. Растворенную вакцину, не использованную в день приготовления, уничтожают. В процессе прививок флакон с растворенной вакциной необходимо периодически встряхивать.

При неполном растворении сухой вакцины или при наличии в ней неразбивающихся хлопьев ее также уничтожают.

2.6. Прививки сухой вакцины из штамма 55 разрешается проводить ветеринарным врачам или опытным ветеринарным техникам под руководством ветеринарного врача. Перед вакцинацией необходимо осмотреть все поголовье животных.

2.7. Профилактические прививки сухой вакцины нельзя проводить в хозяйствах при наличии острых инфекционных болезней животных. Не разрешается также прививать животных с повышенной температурой тела, слабых, истощенных и в последний месяц беременности. Допрививку таких животных проводят после их выздоровления.

Во избежание осложнений не рекомендуется прививать животных в жаркое время года, особенно в условиях дефицита питьевой воды и в холодную дождливую погоду. Привитых животных следует оберегать от переохлаждений и утомительных перегонов. Рабочих волов, лошадей и мулов после прививок освобождают от работы на 5 дней, в исключительных случаях их разрешается использовать на легкой работе.

2.8. Профилактические прививки всех видов сельскохозяйственных животных старше года рекомендуется проводить 1 раз в год в период наилучшего физиологического состояния организма.

2.9. Схема обязательной иммунизации восприимчивых животных при применении вакцины против сибирской язвы из штамма 55 по всей территории СССР, см. п. 2.9 «Наставления по применению жидкой вакцины против сибирской язвы животных из штамма 55» от 29 декабря 1986 г.

2.10. Вынужденные прививки проводят в любое время года, независимо от наличия инфекционных болезней животных в данном хозяйстве. Не разрешается прививать только явно больных животных с повышенной температурой тела. Допрививку таких животных проводят после их лечения.

2.11. Запрещается применять живую вакцину из штамма 55 одновременно с другими биологическими и химическими препаратами. За 10 дней до вакцинации и в течение 10 дней после применения вакцины не рекомендуется подвергать животных обработкам против других инфекционных и инвазионных болезней, а также накожных паразитов.

3. Иммунитет. Наблюдение за привитыми животными

3.1. Иммунитет у животных после прививки наступает через 10 дней и длится не менее 12 мес. В течение этих 10 дней за привитыми животными проводится ветеринарное наблюдение под руководством ветеринарного врача, проводившего иммунизацию.

3.2. Через сутки после иммунизации на месте инъекции вакцины у животных возможно появление незначительной припухлости (реакция на вакцину), исчезающей через 2 — 3 сут. У некоторых животных возможна общая температурная реакция; у животных с пониженной резистентностью организма, при переутомлении, а также в жару и холодную дождливую погоду не исключены поствакцинальные осложнения. Они выражаются в появлении высокой температуры, образовании значительного отека в месте инъекции вакцины и ухудшении общего состояния животного. Животных с поствакцинальными осложнениями необходимо немедленно выделить из стада и оказать им лечебную помощь. Если эти меры не применить, возможна гибель таких животных.

3.3. Молоко от привитых животных разрешается использовать без ограничений, за исключением случаев, когда у животных отмечаются поствакцинальные осложнения и маститы любой этиологии.

Молоко от таких коров уничтожают автоклавированием (1 ч при 134 °С) либо кипячением в растворе соды (2 ч).

3.4. Убой вакцинированных животных на мясо разрешается через 2 нед. после иммунизации. При вынужденном убое привитых животных в течение 2 нед. туша и боенские продукты направляются на промышленную переработку или сжигаются.

3.5. На всех привитых животных составляют описи, которые должны храниться у ветеринарного врача в течение 2 лет. Кроме того, о проведении прививок составляют акт с указанием количества привитых животных по видам и номера серии вакцины, использованной для иммунизации. В акте указывают также фамилию лица, проводившего вакцинацию и осуществляющего наблюдение за содержанием и состоянием животных после прививок.

3.6. В случае, если после вакцинации у животных возникли осложнения (сильно выраженная температурная реакция, отеки, падеж), об этом необходимо сообщить во ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии Госагропрома СССР (601120, Владимирская область, Петушинский район, г. Покров) с указанием номера серии вакцины, даты ее изготовления, времени прививок, условий хранения препарата, количества привитых животных по видам, их состояния перед проведением прививок, характера осложнений и одновременно выслать в институт образцы применявшейся вакцины в количестве не менее 2 ампул.

Ассоциация содействует в оказании услуги в продаже лесоматериалов: столб телеграфный по выгодным ценам на постоянной основе. Лесопродукция отличного качества.

Вакцина против сибирской язвы для животных инструкция

ГОСТ Р 52616-2006

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ВАКЦИНА ПРОТИВ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ЖИВОТНЫХ
ИЗ ШТАММА 55-ВНИИВВиМ ЖИВАЯ

Live vaccine against anthrax of animals from strain 55-VNIIW & M. Specifications

ОКС 11.220
ОКП 93 8470

Дата введения 2008-01-01

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов»

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 454 «Охрана жизни, здоровья животных и ветеринарно-санитарная безопасность продуктов животного происхождения и кормов»

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие Приказом Росстандарта от 27.06.2013 N 208-ст c 01.01.2014

Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 3, 2015 год

ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 8, 2016 год

Поправка внесена изготовителем базы данных

Настоящий стандарт разработан в соответствии с Федеральным законом «О техническом регулировании» в целях формирования нормативной базы для соблюдения требований законопроекта — специального технического регламента «О требованиях безопасности лекарственных средств для животных, процессов их разработки, испытания, производства, изготовления, хранения, перевозки, реализации, применения и утилизации», установления правил и характеристик в сферах производства и обращения продукции, обеспечения научно-технического прогресса и конкурентоспособности продукции. Разработка стандарта позволит унифицировать требования к качеству вакцины, методам контроля, безопасности, упаковке, маркировке, транспортированию, хранению, утилизации.

1 Область применения

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на вакцину против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живую (сухую и жидкую), предназначенную для профилактической иммунизации восприимчивых животных (далее — вакцина).

Вакцина представляет собой взвесь живых спор бескапсульной слабовирулентной культуры сибиреязвенного штамма 55-ВНИИВВиМ в 30%-ном нейтральном растворе глицерина или массу спор, лиофилизированную под вакуумом с защитной средой.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежегодно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

(Измененная редакция, Изм. N 1), (Поправка. ИУС N 8-2016).

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 живая вакцина: Иммунобиологический препарат, получаемый из живых аттенуированных штаммов микроорганизмов, возбудителей болезней животных и человека.

3.2 вакцинация: Применение вакцины для предупреждения инфекционной болезни.

3.3 спора: Форма существования некоторых видов микроорганизмов в неблагоприятных условиях внешней среды неопределенно длительное время.

3.4 капсула: Слизистый слой вокруг бактериальных клеток капсулообразующих микроорганизмов.

3.5 лиофилизация: Высушивание из замороженного состояния под вакуумом.

3.6 вирулентность: Степень патогенности (болезнетворности) микроорганизмов.

3.7 штамм вакцинный: Генетически однородная популяция микроорганизмов с постоянными, наследственно закрепленными свойствами.

3.8 микробиологическая чистота: Отсутствие в популяции штамма микроорганизмов других видов (типов, сероваров).

3.9 диссоциация: Появление в популяции штамма микроорганизмов измененных клеточных форм.

3.10 безвредность вакцины: Отсутствие вредных для организма последствий местного и общего характера после введения вакцины.

3.11 реактогенность: Способность живых вакцин вызывать при введении незначительную реакцию местного или общего характера (отечность, болезненность, кратковременное повышение температуры и др.).

3.12 иммуногенность: Способность вакцины вызывать у вакцинированных особей формирование состояния невосприимчивости против инфекционной болезни.

3.13 концентрация водородных ионов (рН): Реакция среды (кислая, щелочная, нейтральная) рН — отрицательный логарифм концентрации водородных ионов при основании 10.

3.14 колония микроорганизмов: Потомство одной микробной клетки на твердой питательной среде.

4 Технические требования

4.1 Вакцина должна соответствовать требованиям настоящего стандарта и изготавливаться в соответствии с технологическим регламентом (инструкцией) по изготовлению, утвержденным в установленном порядке.

4.2 Сухая вакцина представляет собой лиофилизированную с защитной средой под вакуумом массу живых спор бескапсульной слабовирулентной культуры сибиреязвенного штамма 55-ВНИИВВиМ, с содержанием жизнеспособных спор в пределах 0,2-1,2 млрд в одной ампуле (флаконе) и защитной среды.

4.3 Жидкая вакцина представляет собой взвесь живых спор бескапсульной слабовирулентной культуры сибиреязвенного штамма 55-ВНИИВВиМ в 30%-ном нейтральном растворе глицерина с содержанием спор в пределах 0,02-1,20 млрд в одной ампуле (флаконе).

4.4 Вакцина по физико-химическим, морфологическим, культуральным, биологическим свойствам должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 1.

Характеристика и норма

Внешний вид и цвет

Однородная пористая масса беловато-серого цвета

Прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость с незначительным беловатым осадком, образующимся при хранении, легко разбивающимся в гомогенную взвесь

Наличие посторонней примеси, плесени, неразбивающихся хлопьев, трещин флаконов (ампул)

Не допускается в ресуспензированном виде

Концентрация водородных ионов (рН)

Наличие вакуума в ампулах

Должен быть вакуум

Наличие кислорода и азота во флаконах

Должен быть азот во флаконах при отсутствии кислорода

Массовая доля влаги, %, не более

Время ресуспензирования, мин, не более

Массовая доля глицерина, %

Массовая доля спор, %

В посевах вакцины на питательных средах не должно быть роста посторонней бактериальной и грибной микрофлоры

Типичность роста культуры штамма 55-ВНИИВВиМ

В посевах на питательные среды должен быть типичный рост культуры штамма 55-ВНИИВВиМ. На кровяном агаре через 24 ч инкубирования признаки гемолиза должны отсутствовать

В мазках из бульонных и агаровых культур, окрашенных по Граму, должны быть крупные (3-10) мкм грамположительные палочки, расположенные поодиночке или соединенные в цепочки, а также свободно лежащие споры, представляющие собой блестящие овальные, иногда круглые, образования размером (1,2-1,5)х(0,8-1,0) мкм, в отдельных случаях споры, находящиеся в центре вегетативной клетки или вне ее. Инволюционные формы бактерий должны отсутствовать

Диссоциация, %, не более

Должны быть только неподвижные палочки и цепочки

Должны быть только бескапсульные бациллы

Вакцина должна быть безвредной

Вакцина должна быть слабовирулентной

Вакцина должна быть иммуногенной

4.5 Упаковка и маркировка

4.5.1 Вакцину расфасовывают по 1 см (25 доз); 2 см (50 и 100 доз); 3 см (100 доз); 5 см (100 и 150 доз); 10 см (10 доз); 20 см (20 доз); 50 см (50 доз); 100 см (100 доз) в стеклянные или полимерные флаконы или по 1 см (25 доз) и 2 см (50 и 100 доз) в стеклянные ампулы.

4.5.2 Флаконы с вакциной после лиофилизации заполняют азотом по ГОСТ 9293, укупоривают стерильными резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками по ГОСТ Р 51314, ампулы запаивают под вакуумом.

Флаконы с жидкой вакциной укупоривают стерильными резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками по ГОСТ Р 51314, ампулы запаивают.

4.5.3 На ампулы (флаконы) с вакциной в расфасовке до 20 см наклеивают этикетку или несмываемой краской по стеклу указывают:

— сокращенное наименование вакцины;

— номер серии и дату выпуска (месяц, год)*;
_______________
* Номер серии и дату выпуска (месяц, год) обозначают слитно. При этом последние четыре цифры в номере обозначают месяц и год выпуска вакцины. Цифры, предшествующие последним четырем, являются производственным номером серии.

— срок годности (месяц, год);

— надпись: «Для ветеринарного применения».

— наименование и адрес организации-производителя;

— номер регистрационного удостоверения;

— дату выпуска (месяц, год);

— дозы и способ введения вакцины;

— количество доз во флаконе;

— лекарственную форму вакцины;

— информацию о подтверждении соответствия;

— надпись: «Для ветеринарного применения»;

— обозначение настоящего стандарта;

(Измененная редакция, Изм. N 1), (Поправка. ИУС N 8-2016).

4.5.5 Флаконы (ампулы) с вакциной по 5, 10-25 шт. упаковывают в картонные коробки по ГОСТ 12301 или полимерные контейнеры, обеспечивающие их целостность. В каждую коробку вкладывают инструкцию по применению.

Другие публикации:  Синдром соединительнотканной дисплазии это

4.5.6 На коробку наклеивают этикетку, которая должна содержать:

— наименование и адрес организации-производителя;

— дату выпуска (месяц, год);

— номер регистрационного удостоверения;

— количество разбавителя на одну ампулу (флакон) для внутрикожного и подкожного введения;

— дозы для разных видов животных;

— количество доз в коробке;

— лекарственную форму вакцины;

— информацию о подтверждении соответствия;

— надпись: «Для ветеринарного применения»;

— обозначение настоящего стандарта;

4.5.7 Коробки с вакциной, а также флаконы с вакциной в расфасовке по 50 и 100 см с жидкой вакциной упаковывают в ящики из листовых древесных материалов по ГОСТ 9142 или ящики для посылок по ГОСТ 27840 или другие ящики массой брутто не более 15 кг. Для упаковки флаконов в ящики используют алигнин по ГОСТ 12923 или другие теплоизоляционные материалы. Допускается упаковка вакцины в расфасовке по 10 см непосредственно в ящики, при этом каждый ряд вакцины перекладывают алигнином.

Внутрь каждого ящика вкладывают не менее пяти экземпляров инструкции по применению вакцины и контрольный лист с указанием: наименования организации-производителя; наименования биопрепарата, его количества в ящике, даты упаковки, номера (фамилии) упаковщика.

(Измененная редакция, Изм. N 1), (Поправка. ИУС N 8-2016).

4.5.8 На каждое грузовое место (ящик) наносят транспортную маркировку по ГОСТ 14192 с указанием манипуляционных знаков: «Хрупкое. Осторожно», «Пределы температуры», и предупредительной надписи; «Биопрепараты».

4.5.9 На этикетке транспортной тары или непосредственно на поверхности транспортной тары указывают:

— наименование и адрес организации-производителя;

— дату выпуска (месяц, год);

— количество коробок с вакциной (флаконов) в ящике;

— условия хранения и транспортирования.

4.5.10 Совмещение транспортной маркировки и маркировки, характеризующей упакованную продукцию, на одной стороне транспортной тары не допускается.

5 Требования безопасности

5.1 По биологической безопасности вакцина должна соответствовать требованиям ГОСТ 12.1.008.

5.2 Производственное оборудование, используемое при изготовлении вакцины, должно отвечать требованиям ГОСТ 12.2.003, а производственные процессы — ГОСТ 12.3.002.

5.3 Воздух рабочей зоны должен соответствовать требованиям ГОСТ 12.1.005.

5.4 Персонал, занятый в производстве вакцины, должен быть обеспечен средствами защиты в соответствии с ГОСТ 12.4.011 и пройти обучение безопасным условиям труда в соответствии с ГОСТ 12.0.004.

5.5 Утилизацию вакцины, не прошедшей контроль, оставшейся после использования, а также с истекшим сроком годности проводят путем автоклавирования в течение 2 ч при температуре 134 °С и давлением 2 атм. с соблюдением требований ГОСТ 17.0.0.01.

6 Правила приемки

6.1 Каждая серия вакцины должна быть принята (проверена) в Отделе биологического технического контроля (ОБТК) организации-производителя.

6.2 Серией следует считать определенное количество вакцины, изготовленной в одних производственных условиях за один технологический цикл из одной расплодки штамма, смешанной с защитной средой в одной емкости, расфасованной в ампулы (флаконы) одинаковой вместимости и лиофильно высушенной в одном сублимационном аппарате (для сухой вакцины), или объединенной в одной емкости с 30%-ным нейтральным раствором глицерина и расфасованной в один вид флаконов или ампул (для жидкой вакцины), получившей свой номер, номер контроля и оформленной одним документом о качестве (паспортом).

6.3 В документе о качестве (паспорте) указывают:

дату изготовления (месяц, год);

результаты испытания по показателям качества;

срок годности (месяц, год);

номер и дату выдачи документа о качестве;

заключение и подпись лица, выдавшего документ о качестве.

6.4 Для контроля качества вакцины от каждой серии отбирают выборку. Из выборки выделяют среднюю пробу в количестве 20 ампул (флаконов) с вакциной, 10 из которых используют для испытания по показателям качества, а 10 хранят в архиве в течение срока годности. Количество отобранных проб должно обеспечить проведение анализов в четырех повторностях.

6.5 Архивные образцы маркируют надписью «Архив», опечатывают и снабжают документом установленной формы с указанием:

даты изготовления (месяц, год);

даты отбора проб;

количества отобранных образцов;

должности и подписи лица, отобравшего пробы;

срока годности (месяц, год);

обозначения настоящего стандарта;

срока хранения проб.

6.6 При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве ампул или флаконов, отобранных от той же серии вакцины. Результаты повторного испытания распространяют на всю серию и считают окончательными.

В случае неудовлетворительных результатов повторной проверки серию вакцины считают не соответствующей требованию настоящего стандарта, ее выбраковывают и уничтожают путем автоклавирования в течение 2 ч при температуре 134 °С.

6.7 Контроль вакцины, поступающей с рекламацией, проводит организация-производитель в присутствии представителя ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов».

7 Методы испытания

7.1 Определение внешнего вида, цвета, наличия посторонней примеси, плесени, неразбивающихся хлопьев, трещин ампул (флаконов)

7.1.1 Для определения внешнего вида, цвета, наличия посторонней примеси, плесени, неразбивающихся хлопьев, трещин каждый флакон (ампулу) с жидкой вакциной встряхивают и просматривают в проходящем свете, переворачивая вниз пробкой. Одновременно проверяют прочность укупорки и правильность этикетирования.

7.1.2 Во флаконах и ампулах не должно быть посторонней примеси, плесени, неразбивающихся хлопьев и трещин.

7.2 Определение концентрации водородных ионов (рН)

7.2.1 рН в вакцине определяют согласно [1]. рН должно составлять 7,0±0,2.

7.3 Определение наличия вакуума в ампулах с сухой вакциной; кислорода и азота во флаконах

7.3.1 Наличие вакуума в ампулах с сухой вакциной определяют согласно ГОСТ 28083 с помощью аппарата типа «д’Арсонваль» или «Тесла». В ампулах с сухой вакциной должен быть вакуум.

7.3.2 Наличие кислорода и азота во флаконах с сухой вакциной определяют по ГОСТ 27785. Во флаконах при отсутствии кислорода должен быть азот.

7.4 Определение массовой доли влаги в сухой вакцине

7.4.1 Массовую долю влаги в сухой вакцине определяют по ГОСТ 24061. Массовая доля влаги должна быть не более 3%.

7.5 Определение времени ресуспензирования сухой вакцины

7.5.1 Для проведения испытаний сухой вакцины используют три ампулы с сухой вакциной, в которые после их вскрытия вносят по 1-2 см физиологического раствора. Содержимое ампул после встряхивания должно полностью ресуспензироваться в течение 3 мин.

7.6 Определение массовой доли глицерина в жидкой вакцине

7.6.1 Аппаратура, материалы, реактивы

Термостат с температурой нагрева (22±2) °С.

Набор денсиметров по ГОСТ 18481.

Термометры стеклянные по ГОСТ 13646.

7.6.2 Проведение испытания

Цилиндр с вакциной и денсиметром помещают в термостат, где выдерживают при температуре (22±2) °С в течение 15-20 мин. Аналогичным образом поступают со вторым и третьим флаконами с вакциной.

7.6.3 Обработка результатов

Массовую долю глицерина в вакцине в процентах определяют по показанию денсиметра в соответствии с таблицей 2.

Массовая доля глицерина, %

7.7 Определение количества живых спор

7.7.1 Определение количества живых спор путем посева вакцины на плотные питательные среды

7.7.1.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Автоклав вертикальный или другой марки.

Термостат с температурой нагрева (37±1) °С.

Весы лабораторные среднего класса точности по ГОСТ Р 53228.

Стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284.

Микроскоп биологический марки МБИ по ГОСТ 8074.

Стекла покровные для микропрепаратов по ГОСТ 6672.

Вода дистиллированная для инъекций по [2].

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Раствор физиологический с рН (7,0±0,2) по [3].

Натрий фосфорнокислый пиро по ГОСТ 342.

Агар мясо-пептонный (МПА) по ГОСТ 29112.

Питательный агар сухой «КД».

Среда для культивирования сибиреязвенного микроба — агар СВК.

Твин-80*.
________________
* Фирма «Флюка».

7.7.1.2 Проведение испытания

Для испытания используют следующие агаровые среды; мясо-пептонный агар (МПА), агар СВК, питательный агар КД, которые готовят в соответствии с действующей рецептурой.

Расплавленный и охлажденный до температуры 45 °С-50 °С агар разливают по 15-20 см в стерильные чашки Петри. Для работы используют питательную среду без конденсата, для чего после розлива агара чашки Петри оставляют до момента застывания агара и затем осторожно над пламенем стерильными тампонами удаляют образовавшийся конденсат с крышки чашки. Для проведения испытания берут по три ампулы или по три флакона с сухой вакциной. Содержимое каждой ампулы (флакона) разводят разбавителем — 0,01%-ным водным раствором твина-80 или физиологическим раствором, дистиллированной водой с рН (7,0±0,2) до рабочего разведения в количестве, обозначенном на этикетке коробки с вакциной. Разведенные препараты, а также неразведенные вакцины встряхивают и из каждой ампулы (флакона) готовят по шесть последовательных десятикратных разведений от 10 до 10 . Для каждого разведения используют отдельную пипетку. Разведения вакцины выдерживают при комнатной температуре в течение 15-20 мин и после тщательного перемешивания из двух последних разведений вакцины (10 , 10 ), начиная с последнего, стерильной микропипеткой делают высевы в чашки Петри с агаром. Каждым разведением вакцины засевают три чашки Петри с агаром, внося в каждую по 0,1 см взвеси спор.

После равномерного распределения стерильным шпателем посевного материала по поверхности агара чашки Петри переносят в термостат, ставят вверх дном и выдерживают при температуре (37±1) °С в течение 18-24 ч. При распределении посевного материала каждого разведения вакцины пользуются отдельным стерильным шпателем.

7.7.1.3 Обработка результатов

где — среднеарифметическое количество колоний, выросших в чашках из разведения 10 ;

7.7.2 Определение количества живых спор ускоренным методом

Определение количества живых спор в 1 см вакцины проводят в два этапа: сначала определяют общее количество спор в 1 см вакцины, затем — массовую долю в ней живых спор в процентах. После этого путем расчета определяют действительное число живых спор в 1 см вакцины.

7.7.2.1 Аппаратура, материалы и реактивы по 7.7.1.1.

7.7.2.2 Для подсчета общего количества спор в 1 см вакцину, подготовленную по 7.7.1.2, разводят в соотношении 1:5 физиологическим раствором. Полученной взвесью спор заполняют обычным способом камеру Горяева. Через 10 мин под микроскопом (объектив 40, окуляр 7 или 10) проводят подсчет спор в пяти больших квадратах, расположенных по диагонали, и находят среднеарифметическое количество спор в одном большом квадрате. Общее количество спор в 1 см вакцины , млн, вычисляют по формуле

где — среднеарифметическое количество спор в большом квадрате;

За окончательный результат принимают среднеарифметическое результатов трех определений.

7.7.2.3 Определение массовой доли живых спор

Для этого на предметное стекло стерильной пастеровской пипеткой наливают тонкий равномерный слой расплавленного агара (МПА, СВК, КД). После его застывания стерильной пипеткой наносят каплю вакцины, подготовленной по 7.7.1.2, и, наклоняя стекло в разные стороны, равномерно распределяют каплю по поверхности агара. Предметное стекло с высеянной вакциной помещают в чашку Петри, в которую для создания влажности кладут кусочек ваты, смоченной водой, и чашку Петри ставят в термостат с температурой (37±1) °С.

По истечении 2 ч участок засеянной поверхности агара (МПА, СВК, КД) просматривают под иммерсионной системой микроскопа с фазовоконтрастным устройством (объектив 90, окуляр 7 или 10), для чего на него предварительно помещают покровное стекло. В каждом поле зрения отдельно подсчитывают сибиреязвенные палочки и не проросшие сибиреязвенные споры. Общее число подсчитанных клеток (сибиреязвенных палочек и спор) должно быть не менее 500.

где — число подсчитанных сибиреязвенных палочек;

— общее число подсчитанных клеток (палочек и спор);

7.7.2.4 После определения общего числа спор в 1 см вакцины и доли в ней живых спор C, %, проводят вычисление числа живых спор в 1 см вакцины, млн, по формуле

7.8 Определение массовой доли спор

7.8.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Устройство для наблюдения методом фазового контраста КФ4.

Стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284.

Стекла покровные для микропрепаратов по ГОСТ 6672.

Раствор физиологический с рН (7,0±0,2) [1].

7.8.2 Проведение испытания

Для испытания используют сухую или жидкую вакцину, подготовленную по 7.7.1.2. Из приготовленных вакцин делают разведение 10 на физиологическом растворе. Из разведения вакцины 10 на предметных стеклах готовят раздавленную или висячую каплю и просматривают ее под микроскопом при кратности увеличения 400 -900 в фазовом контрасте. В каждом поле зрения отдельно подсчитывают сибиреязвенные споры и палочки. Общее число подсчитанных клеток (спор и палочек) должно быть не менее 200.

7.8.3 Обработка результатов

Массовую долю спор в вакцине, %, вычисляют по формуле

где — число подсчитанных сибиреязвенных спор;

— общее число подсчитанных клеток (спор и палочек).

Массовая доля спор должна составлять (95,0±5,0)%.

7.9 Определение микробиологической чистоты

7.9.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Микроскоп биологический марки МБИ по ГОСТ 8074.

Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652.

Мясо-пептонный бульон по ГОСТ 20730.

Мясо-пептонный агар по ГОСТ 29112.

Среда Сабуро по ГОСТ 28085.

Среда Китт-Тароцци (МППБ) по ГОСТ 28085.

7.9.2 Проведение испытания

7.9.2.1 Подготовка сред — по ГОСТ 28085.

7.9.2.2 Для испытания используют пять ампул или пять флаконов с вакциной. Содержимое каждой ампулы с сухой вакциной разводят в стерильном физиологическом растворе в объеме, указанном на этикетке коробки с вакциной, используя для каждой ампулы отдельный флакон. Из каждой пробы сухой или жидкой вакцины делают посевы по 0,2-0,3 см в МПБ, МППБ под вазелиновым маслом, на МПА, агар Сабуро в две пробирки с каждой средой и по 0,5-1,0 см в два флакона с МПБ и МППБ под вазелиновым маслом. Через трое суток инкубирования посевов из флаконов с МППБ под вазелиновым маслом проводят пересев на аналогичную питательную среду во флаконах. Посевы инкубируют в течение 10 сут, а пересевы 7 сут при температуре (37±1) °С, для агара Сабуро — при температуре (22±2) °С.

В течение указанного времени посевы ежедневно просматривают на чистоту роста сибиреязвенной культуры. При затруднении дифференциации сибиреязвенной культуры от посторонней бактериальной и грибной микрофлоры из микробных культур готовят мазки на обезжиренных предметных стеклах. Мазки подсушивают на воздухе до полного высыхания, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают по Граму. Краску смывают дистиллированной водой, предметные стекла с мазками высушивают фильтровальной бумагой и просматривают под иммерсионной системой микроскопа.

Другие публикации:  Всемирный день борьбы с вич

7.9.3 Обработка результатов

Во всех питательных средах не должно быть роста посторонней бактериальной и грибной микрофлоры. В МПБ и на МПА должен быть типичный рост культуры штамма 55-ВНИИВВиМ. В мазках, приготовленных из микробных культур и окрашенных по Граму, должна быть сибиреязвенная культура штамма 55-ВНИИВВиМ.

7.10 Определение типичности роста культуры штамма 55-ВНИИВВиМ

7.10.1 Аппаратура, материалы, реактивы по 7.7.1.1. и 7.9.1 и агар кровяной по нормативному документу.

7.10.2 Проведение испытания

Питательные среды (МПБ и МПА) и испытуемую вакцину готовят по 7.9.2. Определение типичности роста проводят путем посева исследуемой серии вакцины по 0,2-0,3 см в две пробирки с МПБ, две пробирки с МПА и по 0,3-1,0 см в два флакона вместимостью 50,0 см или 100,0 см с МПБ, а также бактериологической петлей штрихами (для получения отдельных колоний) на три чашки Петри с МПА и три чашки с кровяным агаром. Через 5 сут инкубирования посевов из флаконов с МПБ проводят пересев на аналогичную среду во флаконах. Посевы выдерживают в течение 10 сут и ежедневно просматривают визуально на типичность роста сибиреязвенной культуры штамма 55-ВНИИВВиМ, пересевы — 5 сут, а посевы на кровяной агар и МПА на чашках Петри — 1 сут при температуре (37±1) °С.

7.10.3 Обработка результатов

В посевах вакцины в МПБ должен быть характерный рост сибиреязвенной культуры штамма 55-ВНИИВВиМ с образованием на дне пробирки или флакона рыхлого осадка, а на поверхности среды — пристеночного кольца. Бульон должен быть прозрачным или с небольшой опалесценцией. При встряхивании пробирки или флакона с посевами осадок разбивается в гомогенную взвесь. Недопустим рост с образованием пленки, помутнением среды. На поверхности МПА должен быть рост культуры штамма 55-ВНИИВВиМ в виде серовато-беловатых, круглых, шероховатых, с серебристым оттенком колоний R-формы, диаметром 3-4 мм.

На кровяном агаре через 24 ч инкубирования должны формироваться серовато-беловатые, круглые и шероховатые колонии диаметром 2-4 мм без признаков гемолиза. В последующие дни гемолиз возможен.

7.11 Определение морфологических свойств штамма 55-ВНИИВВиМ

7.11.1 Аппаратура, материалы и реактивы по 7.7.1.1.

7.11.2 Проведение испытания

Из 24-46 ч микробных культур, выращенных в МПБ и на МПА по 7.10.2, готовят мазки и окрашивают их по Граму, которые просматривают под иммерсионной системой микроскопа.

7.11.3 Обработка результатов

В мазках, окрашенных по Граму, должна быть типичная и чистая культура штамма 55-ВНИИВВиМ в виде однородных стройных палочек и коротких цепочек темно-синего (фиолетового) цвета, а споры должны быть овальной формы, блестящие (неокрашенные), находящиеся в центре вегетативной клетки или вне ее. Инволюционные формы (извитые, округлые и т.д.) должны отсутствовать.

7.12 Определение однородности культуры штамма 55-ВНИИВВиМ

7.12.1 Аппаратура, материалы и реактивы по 7.7.1.1 и 7.9.1 со следующим дополнением:

Сердце крупного рогатого скота [3].

Поджелудочная железа крупного рогатого скота по ГОСТ 11285.

Агар пищевой по ГОСТ 16280 или агар микробиологический по ГОСТ 17206.

Вода водопроводная по ГОСТ Р 51232.

7.12.2 Проведение испытания

При испытании используют 1,3% агара на триптическом переваре сердца, для приготовления которого берут 6,6 кг свежих бычьих сердец, очищенных от жира, режут на кусочки и варят 10-15 мин в 10 дм водопроводной воды при постоянном перемешивании. Мясо пропускают через мясорубку. Отвар охлаждают до температуры (50±5) °С, добавляя холодную воду до первоначального объема. Отвар подщелачивают 20%-ным раствором NaOH до рН 7,8-8,0. Отвар и мясной фарш помещают в бутыль, куда добавляют 1,32 кг поджелудочной железы, 100 см хлороформа и выдерживают в термостате при температуре (48±1) °С в течение 7 сут. Первые трое суток перемешивают через каждые 30 мин, периодически проверяя, чтобы рН составлял 7,8-8,0. Затем перемешивают один раз в сутки и за двое суток до окончания гидролиза перемешивание прекращают. Фильтруют через полотняный фильтр, стерилизуют при температуре (110±5) °С в течение 30 мин.

Для приготовления 1,3%-ного агара берут триптического перевара сердца — 2,4 дм , мясной воды — 2,4 дм , водопроводной воды — 7,2 дм , 0,5%-ного раствора NaCI — 60 см , 20%-ного раствора NaOH — 7,0 см и агара (в % к общему объему) — 1,3%.

Среду стерилизуют в автоклаве 30 мин при температуре (110±5) °С. Содержание аминного азота в среде должно составлять от 160 до 180 мг/%, рН среды до стерилизации 7,7-7,8, после стерилизации 7,4-7,6.

Для проведения испытания используют вакцину из штамма 55-ВНИИВВиМ в разведении (10 ) по 7.7.1.2. Из полученного разведения вакцины делают посевы по (0,10±0,01) см на три чашки Петри с 1,3%-ным агаром, приготовленным на триптическом переваре сердца. Посевы инкубируют в течение 20-24 ч при температуре (37±1)

7.12.3 Обработка результатов

Колонии, выросшие на поверхности 1,3%-ного агара, приготовленного на триптическом переваре сердца в чашках Петри, должны быть однородными (круглые, приподнятые над поверхностью агара, выпуклые, шероховатые, желтовато-белого цвета, диаметром 3-4 мм). Наличие диссоциативных форм колоний, отличающихся по форме, цвету, консистенции и размеру, не должно превышать 5%.

7.13 Определение подвижности культуры штамма 55-ВНИИВВиМ

7.13.1 Аппаратура, материалы и реактивы по 7.7.1.1.

7.13.2 Проведение испытания

7.13.3 Обработка результатов

В «раздавленной или висячей каплях» под микроскопом должны быть только неподвижные палочки и цепочки, состоящие из палочек.

7.14 Определение капсулообразования

7.14.1 Аппаратура, материалы и животные

Холодильник любой марки температурой (4±2) °С.

Термостат температурой (37±1) °С.

Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336.

Стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Иглы инъекционные N 0625 по ГОСТ 25377.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Вода водопроводная по ГОСТ Р 51232.

Раствор физиологический с рН (7,0±0,2) [1].

Сыворотка крови крупного рогатого скота по нормативному документу.

Гидрокарбонатная магниево-кальциево-натриевая природная минеральная вода по нормативному документу.

Эфир для наркоза по нормативному документу.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652.

Мыши белые массой 18-20 г.

Синька Леффлера или краска Романовского-Гимза.

7.14.2 Проведение испытания

Для проведения испытаний на капсулообразование используют среду «Казань», состоящую из 60%-ной природной минеральной (гидрокарбонатной магниево-кальциево-натриевой) стерильной воды и 40%-ной стерильной неконсервированной сыворотки крови крупного рогатого скота, инактивированной при температуре 56 °С. Приготовленную среду разливают в стерильные пробирки, которые закрывают стерильными резиновыми пробками. При этом следует обратить внимание на то, чтобы уровень среды был ниже на 1 см нижнего кольца резиновых пробок. В таком виде среда может храниться при температуре (4±2) °С длительное время, не утрачивая своих свойств.

После разведения сухой или концентрированной жидкой вакцины готовят две средние пробы. Для этого по 5,0 см содержимого каждого из двух флаконов переносят в стерильный флакон, тщательно перемешивают и закрывают флакон резиновой или ватно-марлевой пробкой.

Шприцы и инъекционные иглы стерилизуют путем кипячения в дистиллированной воде в течение 50-60 мин. Ватные тампоны заворачивают в пергаментную бумагу, помещают в бикс и стерилизуют в автоклаве при температуре (120±1) °С в течение 1 ч.

Из каждой приготовленной пробы делают посевы по 1,0 см в две пробирки со средой «Казань» или заражают пять белых мышей, взятых из группы заведомо здоровых животных, внутрибрюшинно в дозе 1 см (40-48 млн живых спор).

По истечении 10-18 ч инкубации при температуре (37±1) °С из микробных культур, выросших в среде «Казань», готовят мазки на обезжиренных предметных стеклах. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют в смеси Никифорова (одна часть этанола и одна часть эфира) в течение 15 мин, после чего высушивают на воздухе и окрашивают синькой Леффлера в течение 15-20 мин. Краску смывают водопроводной водой, предметные стекла с мазками высушивают и просматривают под иммерсионной системой микроскопа.

Все или большинство зараженных белых мышей должны погибнуть в течение пяти суток. Выживших мышей по истечении указанного срока подвергают эвтаназии. Из брюшного экссудата, сердца, печени и селезенки павших белых мышей делают мазки-отпечатки на обезжиренных предметных стеклах, фиксируют, окрашивают, как мазки со средой «Казань», и просматривают под иммерсионной системой микроскопа. В качестве контроля используют 2-ю вакцину Ценковского.

7.14.3 Обработка результатов

В мазках микробной культуры штамма 55-ВНИИВВиМ, выросшей в среде «Казань», или в мазках-отпечатках из брюшного экссудата и органов павших мышей должны быть только бескапсульные сибиреязвенные микробы. В контрольных пробах — капсульные формы микроба.

7.15 Определение безвредности

7.15.1 Материалы, реактивы и животные

Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336.

Пробки резиновые или ватно-марлевые.

Иглы инъекционные N 0416-0426 по ГОСТ 25377.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Раствор физиологический с рН (7,0±0,2) [1].

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652.

Кролики массой 2,5-3,0 кг.

7.15.2 Подготовка к испытанию

Для проведения испытания используют смесь равных объемов вакцины из трех ампул или трех флаконов, которую готовят по 7.7.1.2.

7.15.3 Проведение испытания

Трем клинически здоровым кроликам массой 2,5-3,0 кг вакцину вводят подкожно из расчета 200 млн спор в область наружной поверхности бедра в равных объемах в обе конечности.

7.15.4 Обработка результатов

Вакцину считают безвредной, если все кролики в течение 10 сут после ее введения остаются живыми. Допускается образование отеков на месте введения вакцины, повышение температуры тела у отдельных животных.

7.16 Определение иммуногенной активности

7.16.1 Материалы, реактивы, животные

Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336.

Пробки резиновые или ватно-марлевые.

Иглы инъекционные N 0416-0426 по ГОСТ 25377.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Раствор физиологический с рН (7,0±0,2) [1].

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652.

Культура сибиреязвенная вирулентная для морских свинок — штамм 2-й вакцины Ценковского (М-71 — стандартная заражающая сибиреязвенная культура или 71/12).

Морские свинки массой 350-400 г.

7.16.2 Подготовка к испытанию

7.16.3 Проведение испытания

Срок наблюдения за животными — 10 сут после заражения.

7.16.4 Обработка результатов

Не менее восьми из десяти неиммунизированных морских свинок должны погибнуть, а вакцинированные — не менее восьми из десяти должны остаться живыми в течение 10 сут после заражения.

В случае падежа большого числа вакцинированных морских свинок иммуногенные свойства вакцины проверяют, как указано в 7.16, на удвоенном количестве животных.

В случае получения неудовлетворительных результатов в повторной проверке иммуногенные свойства вакцины проверяют количественным методом в сравнении с референс-препаратом вакцины из штамма 55-ВНИИВВиМ, как указано в 7.16.5.

7.16.5 Определение иммуногенной активности вакцины количественным методом

Метод основан на определении 50%-ной иммунизирующей дозы ( ) вакцины в сравнении с референс-препарата вакцины из штамма 55-ВНИИВВиМ.

7.16.5.1 Подготовка к испытанию

Из сухой или жидкой вакцины, подготовленной по 7.7.1.1 и референс-препарата вакцины из штамма 55-ВНИИВВиМ, делают разведения на стерильном физиологическом растворе с содержанием 10 млн, 2 млн, 400 тыс. и 80 тыс. живых спор в 1 см . Приготовленными суспензиями спор каждого из двух указанных препаратов иммунизируют 30 клинически здоровых морских свинок массой 350-400 г подкожно в область живота в объеме по 0,5 см . Споровую культуру каждого разведения вводят семи или восьми животным — на две первые дозы берут по восемь, на две последние меньшие дозы — по семь животных, с тем, чтобы ко времени заражения в живых осталось не менее шести морских свинок.

7.16.5.2 Проведение испытания

Через 12-14 сут по шесть морских свинок, иммунизированных вакциной из штамма 55-ВНИИВВиМ и референс-препаратом вакцины из штамма 55 ВНИИВВиМ, вакцинированных каждой дозой споровых культур и шесть невакцинированных клинически здоровых морских свинок, заражают вирулентной сибиреязвенной культурой, как указано в 7.16.3.

7.16.5.3 Обработка результатов

Все неиммунизированные морские свинки должны погибнуть в течение 10 сут. Допускается выживание одной невакцинированной морской свинки.

Из иммунизированных животных в указанный срок, в зависимости от введения доз испытуемой вакцины и референс-препарата вакцины из штамма 55-ВНИИВВиМ, некоторое количество остается живыми.

вакцины из штамма 55-ВНИИВВиМ и референс-препарата этой же вакцины вычисляют по формуле

где — логарифм максимальной иммунизирующей дозы (5 млн спор);

— логарифм шага разведения препарата, равного 5;

— отношение числа выживших животных, после заражения, к общему числу морских свинок, которым были введены дозы испытуемого препарата;

— индекс, соответствующий номеру дозы;

— сумма значений , найденных для всех испытанных доз;

В зависимости от числа выживших морских свинок могут быть получены следующие значения и соответствующие им значения , указанные в таблице 3. Значение вакцины из штамма 55-ВНИИВВиМ не должно превышать значение референс-препарата вакцины из штамма 55-ВНИИВВиМ.