Пцр диагностика при гепатитах

Hepatitis D virus (HDV, гепатит D), РНК (ПЦР), качественный, биоптат

Гепатит D — заболевание, вызванное вирусом гепатита D (дельта), который представляет собой небольшой РНК вирус. Вирус гепатита дельта — один из известных пяти вирусов гепатита (А, В, С, D, Е) — может распространяться только в присутствии вируса гепатита В, то есть является его спутником.

Заражение вирусом гепатита D может происходить либо одновременно с вирусом гепатита В (коинфекция), либо «накладываться» на носительство или активную инфекцию гепатита В (суперинфекция). В сочетании с вирусом гепатита В гепатит D вызывает тяжелые осложнения и может быстро прогрессировать в цирроз и рак печени. Гепатит D имеет самый высокий уровень смертности среди всех видов гепатита — около 20%.

Путь передачи вируса гепатита D — парентеральный. В группу повышенного риска входят лица, принимающие инъекционные наркотики, а также реципиенты крови и органов.

Около 15 миллионов человек в мире инфицированы вирусами гепатита D и В, уровень заболеваемости гораздо выше в развивающихся странах Африки, Ближнего Востока и в северной части Южной Америки.

Гепатит D при коинфекции характеризуется коротким инкубационным периодом (около 3-7 недель) и острым началом. Симптомы острой фазы заболевания — повышение температуры, тошнота, потеря аппетита, слабость. Характерно развитие желтухи — пожелтения кожных покровов и белков глаз. Вероятность перехода гепатита D в хроническую форму составляет около 10%. При своевременной терапии в большинстве случаев возможно полное излечение.

При суперинфекции гепатита D прогноз неблагоприятный — в 90% случаев заболевание переходит в хроническую форму и часто приводит к циррозу или раку печени. Вероятность развития фульминантной (скоротечной) формы гепатита при суперинфекции достигает 10-20%.

Исследование биоптата печени позволяет диагностировать латентную форму гепатита D, при которой в анализе крови на РНК вируса гепатита D последний не выявляется. ПЦР биоптата печени — высокоспецифичный и чувствительный метод лабораторной диагностики, позволяющий дифференцировать В, С и D гепатиты, незаменимый в сложных клинических случаях.

Данный анализ позволяет выявить вирус гепатита D в биоптате печени. Анализ помогает диагностировать гепатит D, а также прогнозировать течение заболевания.

Метод ПЦР – полимеразная цепная реакция, позволяющая идентифицировать наличие в биологическом материале искомый участок генетического материала.
Подробнее о методе ПЦР — его разновидностях, преимуществах и области применения в медицинской диагностике.

Референсные значения — норма
(Hepatitis D virus (HDV, гепатит D), РНК (ПЦР), качественный, биоптат)

Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!

ВИРУСНЫЕ ГЕПАТИТЫ

Наборы реагентов для экстракции РНК и ДНК

Плазма и сыворотка

Концентраты (элюаты) воды

ликвор, амниотическая жидкость, мазки из носа, зева

ликвор, моча, слюна

высаживание нуклеиновых кислот

сорбция нуклеиновых кислот на частицах силикагеля

сорбция нуклеиновых кислот на частицах магнетизированного силикагеля

Объем биоматериала, мкл

Объем элюции, мкл

Используемые магнитные штативы

Вирус гепатита А (ВГА, HAV)

Вирусный гепатит А – одна из наиболее распространенных в мире кишечных инфекций. Это острое заболевание печени, передающееся фекально-оральным путем. Возбудителем является вирус гепатита А (HAV), относящийся к семейству Picornaviridae. Эпидемиологическая обстановка по ВГА в России остается неблагоприятной — в последние годы отмечается увеличение числа вспышек.

Решение диагностических и эпидемиологических аспектов проблемы гепатита А во многом определяется возможностями используемых методических подходов.

Выявление РНК вируса гепатита А методом ПЦР имеет значительные преимущества по сравнению с ИФА и биохимическими тестами при выявлении вируса в крови контактных лиц, т.к. РНК возбудителя появляется в крови на третьей неделе от момента заражения и является первым диагностическим маркером, обнаруживаемым в крови пациента (Рис.1). В то время как Аnti-HAV IgM появляются в крови от нескольких дней до нескольких недель после появления РНК вируса гепатита А, АЛТ — через две недели.

Также выявление РНК вируса гепатита А методом ПЦР имеет значительное преимущество в чувствительности (как минимум в 1000 раз) по сравнению с детекцией антигена вируса в объектах окружающей среды (питьевые и сточные воды, воды из поверхностных водоемов и т.д.).

Информация для заказа:

Вирус гепатита В (ВГВ, HBV)

Вирусный гепатит В – широко распространенная инфекция человека, вызываемая ДНК-содержащим вирусом гепатита В, относящегося к семейству Hepadnaviridae.

Вирусный гепатит В представляет собой серьезную проблему здравоохранения. В настоящее время по данным ВОЗ в мире насчитывается около 500 миллионов человек, инфицированных вирусом гепатита В. Общее количество больных хроническим гепатитом В достигает 50 млн. человек.

Результаты лабораторных исследований играют ведущую роль для подтверждения диагноза вирусного гепатита В, установления диагноза хронического вирусного гепатита В, мониторинга активности вирусной репликации у носителей HBsAg, мониторинга эффективности противовирусной терапии.

Выявление ДНК вируса гепатита В c помощью ПЦР используется с целью:

— ранней диагностики острого вирусного гепатита В. Выявление ДНК HBV c помощью ПЦР позволяет эффективно обнаруживать возбудителя в период инфицирования до сероконверсии, так как ДНК HBV появляется в крови в среднем на 3 недели раньше маркера HBsAg.

— выявления скрытых форм вирусного гепатита В (“оccult” hepatitis B). HBsAg в сыворотке таких инфицированных не выявляется, в то время как ДНК HBV выявляется в плазме крови и ткани печени;

— выявления мутантных по HBsAg штаммов вируса гепатита В.

Определение вирусной нагрузки с помощью ПЦР используется для:

— установления диагноза хронического вирусного гепатита В;

— мониторинга эффективности противовирусной терапии;

— мониторинга активности вирусной репликации у носителей HbsAg.

Генотипирование вируса гепатита B целесообразно:

— в рамках эпидемиологического надзора за вирусом гепатита B, для мониторинга циркулирующих генотипов и прогноза развития эпидемиологической ситуации;

— для индивидуализации терапии и более точного прогноза ее эффективности.

Выявление мутаций устойчивости вируса гепатита B (HBV) к противоретровирусным препаратам позволяет проводить антивирусную терапию максимально экономично и эффективно.

Информация для заказа:

Вирус гепатита С (ВГС, HCV)

Вирус гепатита С — РНК содержащий вирус, относящимся к семейству Flaviviridae. Заражение вирусом гепатита С происходит преимущественно при попадании вируса в кровь (при парентеральных вмешательствах или при гемотрансфузиях). Хронический вирусный гепатит С – одно из наиболее распространенных заболеваний печени, ведущих к развитию цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы.

Ведущую позицию в лабораторной диагностике ВГС занимают молекулярно-биологические методы, позволяющие: 1) установить факт инфицированности; 2) установить наличие показаний к противовирусному лечению; 3) выбрать оптимальную схему лечения; 4) своевременно оценить эффективность проводимого лечения и 5) оценить устойчивый ответ на лечение.

Выявление РНК HСV в качественном формате применяется для ранней диагностики острого вирусного гепатита С. РНК ВГС обнаруживается в плазме крови в среднем к 11 дню после заражения. Это позволяет диагностировать острый гепатит С задолго до сероконверсии, что особенно важно для ранней диагностики и проверки донорской крови.

Количественная оценка уровня РНК HСV (вирусная нагрузка) в плазме крови применяется для мониторинга эффективности лечения, что отражено в консенсусном мнении международных экспертов по лечению ХГС и в рекомендациях по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом С Минздрава России от 2013 года. Низкой вирусной нагрузкой принято считать значения менее 400 000 — 800 000 МЕ/мл.

Генотип вируса гепатита С — наиболее важный фактор, от которого зависит эффективность противовирусного лечения. Согласно современной классификации, выделяют 6 генотипов ВГС, из которых в России присутствует только 1, 2 и 3. Согласно Рекомендации по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом С Минздрава России от 2013 года, «генотипирование ВГС должно выполняться всем пациентам до начала противовирусной терапии в целях планирования ее продолжительности, эффективности, в отдельных случаях – расчета дозы противовирусных препаратов».

Выявление полиморфизмов в гене IL28B — единственный рекомендованный фармакогенетический тест для инфицированных вирусом гепатита С. Согласно Рекомендациям по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом С Минздрава России от 2013 года, «определение генотипа пациента по совокупности аллельных вариантов однонуклеотидных полиморфизмов rs12979860 и rs8099917 в гене интерлейкина 28 В (IL28В) по данным исследований для пациентов с генотипом 1 ВГС служит надежным предиктором достижения устойчивого вирусологического ответа на фоне проведения двойной и тройной противовирусной терапии».

ПЦР-диагностика гепатита В (качественно)

Исследование для выявления возбудителя гепатита B (HBV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени определяется наличие ДНК вируса в образце крови.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки к анализу крови не требуется.

Другие публикации:  Кто заразился вич у стоматолога

Как правило, анализ сдается утром натощак.

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Вирусный гепатит В- инфекционное заболевание печени, вызванное ДНК-содержащим вирусом гепатита В.

Источник инфекции — больной или бессимптомный вирусоноситель. HBV передается с кровью и другими биологическими жидкостями.Инкубационный период заболевания – от 4 недель до 6 месяцев.

Для чего используется исследование?

  • Для ранней диагностики вирусного гепатита В.
  • Для подтверждения хронического вирусного гепатита В.
  • Для выявления носителей вирусного гепатита В.
  • Для оценки эффективности противовирусной терапии гепатита В.

Что означают результаты?

Причины положительного результата

Причины отрицательного результата

  • Отсутствие вируса гепатита Вв организме исследуемого.

Вирусный гепатит В нередко сочетается с вирусным гепатитом D.

Ростовский противочумный
институт

ПЦР анализы в Ростове-на-Дону

г. Ростов-на-Дону, ул. Горького, 117
тел. (863) 240-22-66

(863) 240-22-66 — ПЦР-диагностика
(863) 240-22-66 — Бактериология
(863) 234-23-11 — ИФА (антитела)
(863) 240-91-08 — Анализы на аллергию
(863) 234-23-11 — Посевы на дисбактериоз

ПЦР диагностика вирусных гепатитов

В неактивную фазу вирусного гепатита размножение вируса не происходит, вирус не выявляется в крови, пациент практически не заразен и не требует противовирусного лечения. Только современная вирусологическая диагностика позволяет выявить заболевание на ранней стадии

ДНК ВГВ (дезоксирибонуклеиновая кислота вируса гепатита В) представляет собой фрагменты вирусных частиц. Присутствует в крови больного в случае активного размножения вируса гепатита. Определение ДНК вируса позволяет исключить (или подтвердить) активную фазу гепатита. При инфицировании больного мутантным вирусом гепатита В выявление ДНК ВГВ может стать единственным свидетельством репликации вируса.

Вирус гепатита В (Hepatitis B Virus),
качественное определение ДНК

Вирус гепатита В (Hepatitis B Virus),
количественное определение ДНК

Гепатит С (ранее назывался «гепатит ни А ни В») передается при контакте с кровью, при половом контакте.
На протяжении хронического гепатита С выделяют две основные фазы — репликативную и нерепликативную, которые могут многократно сменять друг друга. Только в репликативную фазу вирус гепатита С размножается, обнаруживается в крови и является доступным для действия противовирусных препаратов. Отрицательный результат у пациента с гепатитом С может отражать временное снижение титров вируса до значений, не определяемых доступными методами.
Определение концентрации вируса в крови (количественное определение РНК ВГС) имеет важное значение при оценке эффективности противовирусного лечения. Определение генотипа вируса имеет значение при выборе тактики лечения и прогнозе заболевания.

Вирус гепатита С ( Hepatitis C Virus),
качественное определение РНК

Вирус гепатита С (Hepatitis C Virus),
количественное определение РНК (вирусная нагрузка)

Определение генотипа вируса гепатита С

Как сдать анализы

Для повышения достоверности результатов, анализы желательно сдавать не менее чем через 10-14 дней после последнего приема лекарственных препаратов. Соскоб (мазок) из половых органов желательно сдавать не менее чем через 2 часа после последнего мочеиспускания.

Для сдачи анализов в Ростове-на-Дону Вы можете выбрать наиболее удобное для Вас время (включая субботу) и район города подробнее.

Если Вы сомневаетесь какие именно анализы Вам необходимы, то перед сдачей анализа возможно получить консультацию врача.

Если вы хотите доставить готовый биоматериал (уже взятый Вашим врачом мазок или кровь), то срок доставки в лабораторию при комнатной температуре 6-8 часов, а при температуре 2-8°С (холодильник) — в течение 24-48 часов. Сдать биоматериал можно в офисе на Социалистической. Стоимость ПЦР исследования от 140 рублей (за 1 инфекцию)

240-22-66 — ПЦР-диагностика
(863) 240-22-66 — Бактериология
234-23-11 — ИФА (антитела)
240-91-08 — Анализы на аллергию
234-23-11 — Посевы на дисбактериоз

Как проводится диагностика гепатитов разных типов

Словом «гепатит» называют целый ряд воспалительных заболеваний печени. Далеко не всегда это заболевание вызывается вирусами, хотя вирусный гепатит — один из самых распространенных. Привести к развитию заболевания могут и другие причины. Как проявляется болезнь, какие меры нужны для точной диагностики гепатита и насколько современные диагностические методы точны?

Особенности диагностики гепатита

Чем бы ни был вызван гепатит, разрушения, произведенные им, практически всегда одинаковы — клетки печени перестают выполнять свои функции и гибнут.

Вирусные гепатиты

Самая распространенная группа гепатитов. Разрушения в клетках печени происходят из-за проникновения в организм специфических вирусов. Различают несколько форм вирусного гепатита — A, B, C, D, E и G.

А, В, D и Е проявляются относительно одинаково — диарея, тошнота и рвота, нарастающая слабость, боль в области желудка и правого подреберья, пожелтение кожных покровов и белков глаз, увеличение печени в размерах. Гепатиты С и G более коварны и нередко долгие годы единственным симптомом является непреходящая усталость.

Лабораторные методы диагностики являются основными при выявлении заболевания. Обязателен ПЦР-анализ на выявление фрагментов РНК вируса и иммунологическое исследование, определяющее наличие антител к вирусу. Также необходимо сделать биохимический анализ крови, определить уровень билирубина и ферментов (например, АлТ, АсТ).

Токсические гепатиты

Не только вирусы, но и токсины растительного и искусственного происхождения могут вызвать гепатит. Различные отравляющие вещества, яды, которые содержатся в растениях и грибах, способствуют гибели клеток печени. Диагностика гепатита этого типа проводится путем выявления уровня билирубина, альбумина и протромбина, а также ферментов.

Лучевой гепатит

Одним из проявлений лучевой болезни, которая возникает из-за радиационного воздействия, является лучевой гепатит. В клинической практике данное заболевание встречается редко. Чтобы возник риск развития этой болезни, человек должен достаточно долго (в течение 3-4 месяцев) получать дозы радиации, превышающие 400 рад. Главный лабораторный метод диагностики лучевого гепатита — биохимический анализ крови и анализ на билирубин.

Аутоиммунный гепатит

Это редкая форма гепатита, и наука до сих пор не может объяснить, почему такое заболевание возникает. При аутоиммунном гепатите защитная система дает сбой и начинает атаковать клетки печени так, словно это чужеродные организмы. Данная форма гепатита часто сопровождает другие аутоиммунные заболевания, но может развиваться и самостоятельно. Для лабораторной диагностики аутоиммунного гепатита исследуется уровень гамма-глобулинов и IgG (болезнь можно заподозрить, если их показатели выше нормальных вдвое и больше), АсТ, АлТ.

Методы лабораторной диагностики вирусных гепатитов

Поскольку вирусные гепатиты распространены шире всего, остановимся на лабораторных методах их диагностики подробнее. Следует сказать, что именно анализ крови может дать больше всего информации об этом заболевании. Инструментальные методы (КТ, МРТ, УЗИ) для диагностики гепатита малоэффективны, они могут дать информацию о состоянии и структуре печени, но не о том, какой именно вирус поразил организм и как давно это произошло.

  • Общий и биохимический анализ крови . Для этого типа гепатита характерны низкий уровень лейкоцитов и высокая скорость оседания эритроцитов (СОЭ), пониженный альбумин и билирубин.
  • Выявление антител к вирусу . Антитела к вирусу гепатита А Анти-НАV IgM можно обнаружить в самом начале заболевания, при появлении первых симптомов, сразу после окончания инкубационного периода. Самый надежный метод диагностики — ПЦР-анализ, позволяющий побнаружить в сыворотке крови антитела даже тогда, когда их концентрация ничтожно мала. Более того, метод ПЦР дает информацию о том, когда именно произошло заражение.
  • Анализ на определение РНК вируса . ПЦР-анализ дает возможность обнаружить и фрагменты РНК вируса гепатита А.
  • Общий и биохимический анализ крови . Как и при гепатите А, этот анализ позволяет оценить изменения в работе и состоянии печени.
  • Анализ на антигены. HBsAg — самый ранний маркер этого вируса, его можно обнаружить уже в инкубационном периоде. Количественное определение этого антигена используют не только для подтверждения диагноза, но и для определения стадии — острой или хронической.
  • Анализ на антитела к антигенам вирус а. Наличие антител к HB-core Ag может говорить о том, что человек когда-то переболел гепатитом В, поскольку эти антитела сохраняются в крови еще очень долго после выздоровления, иногда — всю жизнь.
  • Общий и биохимический анализ крови.
  • Анализ на антитела . При проведении выявляется наличие антител IgM.
  • Анализ на определение РНК вируса . Проводится методом ПЦР, позволяет выявить болезнь на ранней стадии и избежать ее перехода в хроническую форму.
  • Определение интерлейкина 28 бета . Анализ, проводится методом ПЦР, позволяет спрогнозировать возможную эффективность лечения.

Гепатиты D и G

  • Общий и биохимический анализ крови.
  • Определение антител к антигенам. В момент, когда заболевание находится в острой стадии, анализ показывает высокое содержание антител IgM. После этого в течение какого-то времени могут быть обнаружены другие антитела — IgG.
  • Определение РНК вируса. При помощи ПЦР-метода РНК вируса можно обнаружить даже при его малой концентрации. Анализ дает информацию не только о типе вируса, но и о стадии болезни.
  • Общий и биохимический анализ крови.
  • Анализ на определение антител. Это основной лабораторный метод диагностики гепатита Е. Он показывает наличие антител IgM и IgG.

Лабораторные исследования — крайне важная часть диагностики гепатита, и если у вас есть подозрение на это заболевание, необходимо срочно сдать анализы. От их результатов зависит схема и эффективность лечения гепатита.

Другие публикации:  Через сколько дней можно сдавать анализ на вич

Очень час­то ди­аг­нос­ти­ка ге­па­ти­та вклю­ча­ет в се­бя не толь­ко ла­бо­ра­тор­ные, но и ин­ст­ру­мен­таль­ные ис­сле­до­ва­ния — как пра­ви­ло, УЗИ пе­че­ни. Од­на­ко этот ме­тод счи­та­ет­ся лишь вспо­мо­га­тель­ным.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ

А. А. Асратян Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН,
Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова

Основой лабораторной диагностики вирусных гепатитов служат:

— знания об их возбудителях и репликации

— информация о появлении и исчезновении маркеров инфицирования

— современные иммунохимические и молекулярно- биологические методы детекции антигенов, антител и нуклеиновых кислот/

Лабораторная диагностика гепатита В (ГВ) Строение вириона см. рис. 1.

Лабораторная диагностика ГВ — основана на выявлении специфических для ГВ антигенов и соответствующих антител в крови, а также вирусных нуклеиновых кислот, основными из которых являются:

НВ sAg — анти-НВ s

анти-НВс класса Ig М и IgG

НВе Ag — анти-НВе

Наиболее широко в диагностике ГВ используется определение НВsAg. Данный антиген выявляется как при остром, так и при хроническом заболевании (однако острая инфекция обычно подтверждается наличием высоких титров анти-НВс IgМ). При остром ГВ поверхностный антиген вируса обнаруживается через 3-5 недель от момента инфицирования, то есть задолго до появления клинических признаков болезни и в этих случаях является единственным серологическим маркером. НВsAg постоянно выявляется в преджелтушном и желтушном периодах болезни. Персистирование НВsAg в течение 6 месяцев и более указывает на затяжное или хроническое течение болезни, и позволяет предположить хроническое носительство вируса. Элиминация НВsAg и появление антител к нему является непременным условием выздоровления. Серологическими маркерами репликации ВГВ являются — анти-НВс класса IgМ, НВеAg, ДНК и ДНК-полимераза, которые обнаруживаются при остром ГВ с первых дней клинических проявлений и могут обнаруживаться при обострении хронического ГВ. Серологические маркеры репликации ВГВ определяют как в целях общей диагностики, так и для оценки эффективности применяемой терапии. НВсAg выявляется в ткани печени и не определяется в сыворотке крови. Опосредовано его присутствие в организме отражают циркулирующие антитела – анти-НВс класса IgМ и IgG. В острый период ГВ наличие анти-НВс класса IgМ является дополнительным маркером этого заболевания. Однако необходимо учитывать, что около 50% больных хроническим ГВ также могут иметь эти антитела в периоде обострения, но чаще в низких концентрациях. Наличие в сыворотке крови только анти-НВс класса IgG наблюдается в период между исчезновением НВsAg и образованием анти-НВs. Сочетанное выявление анти-НВс класса IgG в низком титре с анти-НВs указывает на перенесенную ГВ-инфекцию и наличие иммунитета. Тестирование НВеAg проводят в сыворотках крови только с наличием НВsAg и позитивный результат данного маркера свидетельствует об активном процессе – либо подтверждает диагноз острого ГВ, либо свидетельствует об обострении хронического ГВ. Длительность циркуляции НВеAg имеет важное прогностическое значение: выявление НВеAg через 2 и более месяца после начала заболевания служит признаком возможного развития хронического гепатита. Выявление НВеAg без присутствия НВsAg в сыворотке крови в подавляющем большинстве случаев указывает на ложный результат анализа. Однако больные, инфицированные мутантным вирусом могут оставаться серонегативными по НВеAg, несмотря на сохраняющуюся инфекционность и наличие анти-НВе Наличие ДНК-ВГВ (наиболее чувствительный маркер продолжающейся репликации ВГВ) в сыворотке крови указывает на высокую инфекционность данного образца и активное размножение вируса в организме. Позитивный результат удается зарегистрировать практически у всех больных острым ГВ в разгар заболевания. Снижение его концентрации в процессе лечения хронического гепатита является хорошим прогностическим признаком, указывающим на эффективность применяемой терапии. Высокая активность аминотрансфераз сыворотки отражает воспалительное повреждение ткани печени, вызываемое преимущественно реакциями иммунной системы организма против инфицированных вирусом гепатоцитов, а не прямым цитопатическим действием вируса. Высокий уровень ДНК-ВГВ в сочетании с низким уровнем аминотрансфераз свидетельствует о недостаточном иммунном ответе организма. Выявление анти-НВе при отсутствии НВеAg и ДНК-ВГВ свидетельствует о закончившейся активной репликации инфекции. Сероконверсия НВsAg в анти-НВs происходит у 90-95% больных с острым ГВ в стадии разрешения инфекционного процесса и, является показателем иммунитета к вирусу ГВ, то есть наличие анти-НВs свидетельствует о перенесенной инфекции и наличие иммунитете к этой инфекции. Лица, имеющие эти антитела в защитной концентрации (10 МЕ и более) не болеют ГВ и не нуждаются в вакцинации. Все применяемые методы исследования для определения специфических маркеров ГВ можно разделить на 2 группы – иммунохимический и молекулярно-биологические. Иммунохимические – основное место принадлежит иммуноферментному анализу (ИФА) с его высокой чувствительностью и специфичностью, простотой проведения и стабильностью реактивов. Молекулярно-биологические – точечная и жидкостная гибридизация, а также цепная полимеразная реакция (ПЦР) – позволяет выявлять наличие ДНК-ВГВ непосредственно, либо с помощью определения вирусоспецифического фермента – ДНК- полимеразы. НВ sAg /анти-НВ s Для выявления основного маркера ВГВ, разработаны разнообразные методы, позволяющие определить антиген в концентрации до 0,05 нг/мл, которые подразделяются на так называемые «поколения» (табл. 1). В настоящее время основным методом обнаружения НВsAg является ИФА Важным этапом в развитии лабораторной диагностики вирусных гепатитов в России стали проведение (с 1998 г.) сравнительных испытаний диагностических препаратов для оценки их качества под эгидой МЗ РФ. Современные диагностические препараты обладают высокой специфичностью, но возможны и ложноположительные результаты. Для разграничения ложноположительных от истинно положительных результатов применяется тест нейтрализации НВsAg – специфической сывороткой. Принципиально новым для системы выявления НВsAg стало требование к отечественным производителям диагностических препаратов – обязательное включение в тест-систему слабоположительного контрольного образца, содержащего НВsAg в концентрации 1 нг/мл. Для определения анти- НВsAg был испытан весь спектр иммунохимических методов, основной из которых сейчас – ИФА (для качественного и количественного анализа). Анти-НВс класса Ig М и IgG , НВе Agанти-НВе (рис. 2 и табл. 2) Для тестирования этих маркеров могут быть использованы различные варианты твердофазного иммуноанализа: иммуноферментный, радиоиммунный, химиолюминисцентный и их различные варианты. ДНК ВГВ — определяют при помощи проведения ПЦР– анализа. В настоящее время наиболее широкое распространение получили амплификационные методы детекции ДНК ВГВ. Появилась возможность определять ДНК ВГВ в качественном и количественном варианте.

Лабораторная диагностика гепатита Д (ГД) Вирус гепатита Д (ВГД) – это дефектный вирус, содержащий одно-спиральную РНК, которому для репликации необходимо помощь вируса ГВ для синтеза оболочечных белков, состоящих из HBsAg, который используется для инкапсуляции генома ВГД. ВГД не принадлежит ни к одному из известных семейств вирусов животных, по своим свойствам ВГД наиболее близок к вироидам и сателлитным вирусам растений. Лабораторная диагностика осуществляется путем обнаружения серологических маркеров ВГД, включая наличие антигена, антител к нему и РНК ВГД. Обнаружение антигена ВГД и РНК ВГД в сыворотке крови или ткани печени свидетельствует о наличии активной ГД-инфекции, однако, следует отметить, что эти маркеры могут не обнаруживаться в сыворотке больных фульминантным ГД. Маркером активной репликации ВГД также является анти-ВГД класса IgМ. Серологические маркеры инфекции ГД зависят от того, как был приобретен вирус – в виде коинфекции с ВГВ (у большинства больных заболевание имеет острое течение и заканчивается выздоровлением) или суперинфекции у больных с хронической ГВ-инфекцией (протекает тяжелее, чем коинфекция — в 10% развивается фульминантный гепатит). При коинфекции в большинстве случаев антитела — анти-ВГД класса IgМ и IgG — обнаруживаются в течение заболевания. Титр анти-ВГД обычно снижается до практически неопределяемых уровней после выздоровления, и не сохраняется никаких серологических маркеров того, что человек был когда-либо инфицирован ВГД. Антиген ВГД определяется только у 25% больных и обычно исчезает вместе с исчезновением HВsAg. При суперинфекции у больных с хронической ГВ-инфекцией серологическая картина имеет следующие характерные особенности: – титр HBsAg снижается к моменту появления антигена ВГД в сыворотке; — антиген ВГД и РНК-ВГД продолжают определяться в сыворотке, так как обычно у большинства пациентов с суперинфекцией ГД (70-80%) развивается хроническая инфекция, в отличие от случаев коинфекции; — определяются высокие титры антител (анти-ВГД) как класса IgМ, так и IgG, которые сохраняются неопределенное время. Серологические маркеры вируса ГД определяют методом иммуноферментного и радиоиммунного анализа, а РНК-ВГД — методом полимеразной цепной реакции. Отечественными и зарубежными промышленными биотехнологическими предприятиями выпускаются диагностические наборы, включающие все необходимые компоненты и реактивы для постановки теста. В диагностических препаратах используют дельта-антиген, полученный из печени сурков, экспериментально зараженных ГД; антиген, выделенный из печени погибших носителей ВГД; дельта-антиген, полученный генно-инженерным способом.

Лабораторная диагностика гепатита С (ГС) Открытие возбудителя ГС стало возможным благодаря методам молекулярной биологии в 1989-1991 гг. Сначала путем клонирования был получен из сыворотки больных с гепатитом “ни-А, ни-В” вирусный геном, а затем был установлена и структура самого вируса. Физико-химическая характеристика вируса позволили отнести ВГС к семейству флавовирусов. Геном вируса ГС (ВГС) представлен однонитчатой позитивной РНК, состоящих из 10 000 нуклеотидных оснований, образующих регионы, которые кодируют три структурных белка (С, Е1, Е2) и пять неструктурных (NS2, NS3, NS4, NS5). Особенностью ВГС является чрезвычайно высокая гетерогенность его генома. Анализ нуклеиновых кислот РНК-ВГС различных изолятов выявил существенные отличия в их первичной структуре. На основании этих данных была построена классификация ВГС, разделяющая их на варианты ( их 6-9) и субтипы- генотипы, одни из которых присутствуют во всех регионах мира, а другие только в отдельных странах. Лабораторная диагностика ГС была решена при помощи современных методов молекулярной биологии, учитывая, что при ГС вирус находится в крайне низкой концентрации и его антигены не доступны выявлению с помощью современных методов индикации, усилия исследователей сосредоточены на выявлении антител к различным антигенным компонентам вируса, обнаружение которых может служить индикатором наличия вируса. В качестве антигенов использовали белки, кодированные структурной и неструктурной зоной РНК-ВГС, полученные при помощи рекомбинантной технологиии или синтеза (полипептиды, используемые в современных иммунологических методах – С22-3; С33с, С100-3, С200, NS5, S-1-1). Лабораторная диагностика ГС основывается на обнаружении серологических маркерв ВГС: антител к вирусу ГС (анти-ВГС, анти-ВГС класса IgМ, IgG) методом ИФА и РНК-ВГС методом ПЦР. К настоящему времени разработаны 4 поколения тест-систем для выявления анти-ВГС в иммуноферментном методе, но ИФА первого поколения сейчас не используется из-за низкой чувствительности. РНК-ВГС является показателем активной репликации ВГС и самым ранним маркером инфекции, и может быть обнаружена методом полимеразной цепной реакции уже через 1- 2 недели после инфицирования, незадолго до повышения уровня сывороточных трансаминаз. Анти-ВГС обнаруживаются к 5-6 неделе после начала гепатита в 80% случаев и к 12 неделе у 90% лиц методом иммуноферментного анализа. При определении анти-ВГС в некоторых случаях регистрируется ложноположительная реакция. Для разграничения ложноположительных образцов от образцов действительно содержащих антитела к ВГС, разработаны дополнительные тесты – рекомбинантный иммуноблотинг, определение спектра белков анти-ВГС. Иммуноблотинговые диагностикумы позволяют исключить неспецифический результат, полученный методом ИФА, однако визуальная оценка иммуноблотинговых полос может быть неоднозначной в разных диагностических центрах. В нашей стране более широкое распространение получили отечественные подтверждающие твердофазные иммуноферментные тест-системы (так называемы системы «Спектр»), основанные на определении антител к отдельным вирусным антигенам: core, NS3, NS4ab, NS5a. Выявление РНК ВГС считается «золотым» стандартом в диагностике ГС и подтверждением положительных результатов обнаружения анти-ВГС. В настоящее время для индикации РНК ВГС используется ПЦР в качественном и количественном варианте. Чувствительность методов определения РНК ВГС повышается с каждым годом, достигая в настоящее время 10-50 копий РНК в 1 мл крови. Диагноз хронического ГС у лиц с наличием анти-ВГС обычно ставится на основании повышенных печеночных проб в течение более 6 месяцев.

Другие публикации:  Лечение гепатит с в екатеринбурге

Лабораторная диагностика гепатита А (ГА) Вирус ГА (рис. 3) — это РНК- содержащий вирус, размером 27 нм, классифицированный как пикорнавирус. Во всех изолятах собранных в разных частях мира, наблюдается только один серотип ВГА. ВГА не имеет наружной оболочки, но состоит из наружной белковой капсулы, или капсида, содержащего внутри положительную одноцепочную РНК, который действует в качестве матрицы для выработки вирусных белков внутри клетки-хозяина. Лабораторная диагностика ГА основана на выявлении маркеров вируса ГА – антигена ВГА, антител (анти-ВГА класса IgМ и IgG ), а также РНК ВГА. Окончательным доказательством о текущей или недавней инфекции служит наличие в сыворотке крови (даже в одной пробе сыворотки) антител к ВГА класса IgM (анти-ВГА IgM) и наличие ВГА в фекалиях. На перенесенную инфекцию ГА, а также на длительный иммунитет, указывает наличие антител к ВГА класса IgG (анти-ВГА IgG). Диагноз острого ГА подтверждается в острой или ранней стадии выздоровления при наличии анти-ВГА класса IgM, которые появляются в последние 5-10 дней инкубационного периода и продолжают выявляться на протяжении 6-7 месяцев от начала заболевания. Кроме того, эти антитела могут быть выявлены в первые месяцы у лиц (20-30%), вакцинированных инактивированной вакциной против ГА. Их образование связано с первичным иммунным ответом на введение антигена, а не на инфекцию, вызванную вакциной. РНК ВГА может быть выявлена за несколько дней до повышения активности АлАТ и в течение 5 — 59 дней заболевания при типичном течении ГА; при затяжных случаях — РНК ВГА в среднем может определяться до 95 дней. Антиген вируса ГА (ВГА-Ag) обнаруживается в фекалиях больных за 7-10 дней до проявления клинических симптомов и в первые дни заболевания, что используется также для ранней диагностики и выявления источников возбудителя инфекции. Концентрация ВГА в фекалиях является наивысшей на протяжении 2-х нед. перед появлением желтухи. У взрослых выделение вируса с фекалиями продолжается обычно менее одной недели после появления желтухи. Вирус, однако, был обнаружен также через 2 мес. от начало заболевания (во время обострения). Дети могут выделять вирус более длительно, чем взрослые, возможно в течение нескольких недель после клинического проявления заболевания. Хроническое выделения ВГА из фекалий не отмечается. Определение антигена ВГА нашло также применение в санитарной вирусологии при исследовании воды на наличие вируса. Анти-ВГА класса IgG (рис. 4) также появляются рано в начале заболевания (с 3-4 недели), сохраняются на протяжении всей жизни и обеспечивают пожизненную защиту от этого заболевания. Определение анти-ВГА IgG используется для изучения иммуноструктуры населения, динамики специфического гуморального иммунитета. Определение анти-ВГА класса IgG важно также для пред- и поствакцинального скрининга (минимальная протективная концентрация анти-ВГА соответствует 20 МЕ/л). Для их определения отечественными производителями выпускаются коммерческие диагностические препараты иммуноферментного анализа. Лабораторная диагностика основана на выявлении маркеров вируса ГА с помощью специфических иммунодиагностических методов — методы ИФА, РИА. Отечественными и зарубежными промышленными биотехнологическими предприятиями выпускаются диагностические наборы, включающие все необходимые компоненты и реактивы для постановки теста. Кроме твердофазных ИФА и РИА с успехом применяется и метод иммуноэлектронной микроскопии, метод ПЦР. Все вышеупомянутые методы иммунодиагностики с равной вероятностью выявляют инаппарантные, бессмиптомные или клинически выраженные формы ГА. Особое место в лабораторной диагностике ГА занимают молекулярно-генетические методы тестирования РНК ВГА. ПЦР диагностика позволяет обнаружить РНК ВГА в концентрации 40 копий/мл. В настоящее время происходит накопление данных о месте ПЦР в системе лабораторной диагностики ГА.

Лабораторная диагностика гепатита Е (ГЕ) Этиологический агент гепатита Е (ГЕ) — это сферический вирус, лишенный внешней оболочки, это односпиральный РНК-вирус размером около 32-34 нм в диаметре. При постановке диагноза ГЕ в каждом отдельном случае необходимо принять во внимание несколько диагностических аргументов: — наличие у больного симптомокомплекса острого, и предположительно инфекционного гепатита, — надежное исключение этиологического участия вирусов ГА и ГВ, основанное на отрицательных результатах серологических тестов — анти-ВГА класса IgM и анти-НВс класса IgM, — тщательный анализ данных эпидемиологического анамнеза, включая указания на недавние выезды в эндемичные регионы, — исследование (по возможности) фекалий больного на присутствие частиц вируса ГЕ методом иммуноэлектронной микроскопии, ПЦР. Существуют диагностические методы, основанные на применении иммунофлюоресцирующих антител (МФА) для определения антигена ВГЕ в фекалиях и иммуноферментного анализа (ИФА) для определения антител к ВГЕ — анти-ВГЕ класса IgM и IgG. Наличие анти-ВГЕ класса IgM с высокой частотой определяются в сыворотках больных ГЕ в острой стадии заболевания и в период ранней реконвалесценции; выявление анти-ВГЕ класса IgG свидетельствуют о перенесенной в прошлом ГЕ — инфекции. Для диагностики ГЕ определяют также РНК ВГЕ. Отечественные фирмы производители диагностических тест-систем для выявления маркеров вирусных гепатитов:

МОСКВА и область — НИАРМЕДИК — ЭКОлаб — БИОСЕРВИС

НОВОСИБИРСК — ВЕКТОР БЕСТ — ВЕКТОР МБС ( МЕДИКОБИОЛ.СОЮЗ) — ВЕКТОР БИАЛЬГАМ

НИЖНИЙ НОВГОРОД — МИКРОГЕН (бывший ИМБИО) — ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ САНКТ-ПЕТЕРБУРГ — АВИЦЕННА — АКВАПАСТ